ⅠNуклеинова киселинаiвъведение
Нуклеиновата киселина се разделя на дезоксирибонуклеинова киселина (ДНК) и рибонуклеинова киселина (РНК), сред които РНК се разделя на рибозомна РНК (рРНК), информационна РНК (тРНК) и трансферна РНК (тРНК) според различните й функции.ДНК е концентрирана главно в ядрото, митохондриите и хлороформа, докато РНК е разпределена главно в цитоплазмата.Като материална основа на генната експресия, екстракцията на нуклеинова киселина играе изключително важна роля в изследванията на молекулярната биология и клиничната молекулярна диагностика.Концентрацията и чистотата на екстракцията на нуклеинова киселина ще повлияе пряко на последващите PCR, секвениране, векторна конструкция, ензимно смилане и други експерименти.
Ⅱ Метод за извличане и пречистване на нуклеинова киселина
① Метод на екстракция с фенол/хлороформ
Екстракцията с фенол/хлороформ е класически метод за екстракция на ДНК, който използва главно два различни органични разтворителя за третиране на пробите, разтваряне на базирана на ДНК нуклеинова киселина във водната фаза, липиди в органичната фаза и протеини между двете фази.Този метод има предимствата на ниска цена, висока чистота и добър ефект.Недостатъците са сложна работа и дълго време.
② Тризол метод
Тризол методът е класически метод за екстракция на РНК.Методът Trizol се разделя на водна фаза и органична фаза след центрофугиране с хлороформ, при което РНК се разтваря във водната фаза, водната фаза се прехвърля в нова EP епруветка, утаяването се получава след добавяне на изопропанол и след това пречистване с етанол.Този метод е подходящ за екстракция на РНК от животински тъкани, клетки и бактерии.
③ Метод за пречистване с центробежна колона
Методът за пречистване на центрофужна колона може да адсорбира ДНК специално чрез адсорбционни материали от специална силициева матрица, докато РНК и протеинът могат да преминат гладко и след това да използват високо ниво на сол с ниско РН за комбиниране на нуклеинова киселина, елуиране с ниско съдържание на сол с висока стойност на РН за отделяне и пречистване на нуклеинова киселина.Предимствата са висока концентрация на пречистване, висока стабилност, липса на нужда от органичен разтворител и ниска цена.Недостатъкът е, че трябва да се центрофугира стъпка по стъпка, повече операции.
④ Метод с магнитни перли
Методът с магнитни перли е да се раздели пробата от клетъчна тъкан през лизата, да се освободи нуклеиновата киселина в пробата и след това молекулите на нуклеиновата киселина се адсорбират специфично върху повърхността на магнитната перла, докато примеси като протеини и захари остават в течността.Чрез етапите на разделяне на клетъчна тъкан, свързване на магнитни перли с нуклеинова киселина, промиване на нуклеинова киселина, елуиране на нуклеинова киселина и т.н., накрая се получава чиста нуклеинова киселина.Предимствата са лесна работа и краткотрайна употреба, без необходимост от стъпаловидно центрофугиране.Има ниски технически изисквания и може да реализира автоматична и масова работа.Специфичната комбинация от магнитни топчета и нуклеинова киселина прави извлечената нуклеинова киселина с висока концентрация и чистота.Недостатъкът е, че текущата пазарна цена е сравнително скъпа.
⑤ Други методи
В допълнение към горните четири метода има крекинг при кипене, метод с концентрирана сол, метод с анионен детергент, ултразвуков метод и ензимен метод и др.
Ⅲ Тип екстракция на нуклеинова киселина
Foregene разполага с водещата в света Direct PCR платформа, платформа за изолиране на РНК с две колони (само ДНК + само РНК).Основните продукти включват комплекти за изолиране на ДНК/РНК, PCR и директни PCR реагенти, серия реагенти за молекулярна лаборатория.
① Обща екстракция на РНК
Пробите за екстракция на тотална РНК включват кръв, клетки, животински тъкани, растения, вируси и др. Висока чистота и висока концентрация на тотална РНК могат да бъдат получени чрез екстракция на тотална РНК, която може да се използва в RT-PCR, анализ на чипове, in vitro транслация, молекулярно клониране, Dot Blot и други експерименти.
Свързани с ForegeneКомплекти за изолиране на РНК
Комплект за изолиране на тотална РНК от животни--Бързо и ефикасно извличане на обща РНК с висока чистота и високо качество от различни животински тъкани.
Комплект за изолиране на обща РНК клетка--Високо пречистена и висококачествена обща РНК може да бъде получена от различни култивирани клетки за 11 минути.
Комплект за изолиране на обща растителна РНК--Бързо извличайте висококачествена обща РНК от растителни проби с ниско съдържание на полизахариди и полифеноли.
Комплект за изолиране на вирусна РНК--Бързо изолиране и пречистване на вирусна РНК от проби като плазма, серум, телесни течности без клетки и супернатанти от клетъчни култури.
② Екстракция на геномна ДНК
Пробите за екстракция на геномна ДНК включват почва, изпражнения, кръв, клетки, животински тъкани, растения, вируси и др. Екстракцията на геномна ДНК може да се използва при ензимно смилане, конструиране на ДНК библиотека, PCR, подготовка на антитела, Western blot хибридизационен анализ, генен чип, висока - секвениране на пропускателна способност и други експерименти.
Свързани с ForegeneКомплекти за изолиране на ДНК
Комплект за изолиране на ДНК от животински тъкани--Бързо извличане и пречистване на геномна ДНК от множество източници, като животински тъкани, клетки и др.
Blood DNA Midi Kit (1-5 ml)--Бързо пречистване на висококачествена геномна ДНК от антикоагулирана кръв (1-5 ml).
Комплект за ДНК изолиране на букален тампон/FTA карта--Бързо пречистване на висококачествена геномна ДНК от проби от букален тампон/FTA Card.
Комплект за изолиране на растителна ДНК--Бързо пречистване и получаване на висококачествена геномна ДНК от растителни проби (включително полизахариди и полифенолни растителни проби)
③ Екстракция на плазмид
Плазмидът е вид кръгла малка молекула ДНК в клетките, която е общ носител за рекомбинация на ДНК.Методът за екстракция на плазмид е да се отстрани РНК, да се отдели плазмид от бактериална геномна ДНК и да се отстранят протеини и други примеси, за да се получи относително чист плазмид.
Общи плазмидни мини комплекти--Бързо пречистване на висококачествена плазмидна ДНК от трансформирани бактерии за рутинни експерименти по молекулярна биология като трансформация и ензимно смилане
④ Други видове екстракция, екстракция на miRNA и др.
Комплект за изолиране на животинска миРНК--Бързо и ефикасно извличане на малки РНК фрагменти от 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA от различни животински тъкани и клетки
Ⅳ Изисквания за извличане на нуклеинова киселина и резултат от пречистванеs
① За да се гарантира целостта на първичната структура на нуклеиновата киселина.
② Намаляване на намесата на протеини, захари, липиди и други макромолекули
③ Не трябва да има органичен разтворител или висока концентрация на метални йони, които могат да инхибират ензима в пробите от нуклеинова киселина.
④ РНК и други нуклеинови киселини трябва да бъдат елиминирани при извличане на ДНК и обратно.
Време на публикуване: 24 ноември 2022 г
